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Jul 27, 2023

Sviluppo di una metodologia innovativa per la determinazione di 6

Scientific Reports volume 13, numero articolo: 14172 (2023) Cita questo articolo 3 Dettagli metriche altmetriche 6-tioguanina è un farmaco immunosoppressore, un analogo della guanina, applicato per il trattamento acuto

Rapporti scientifici volume 13, numero articolo: 14172 (2023) Citare questo articolo

3 Altmetrico

Dettagli sulle metriche

La 6-tioguanina è un farmaco immunosoppressore, un analogo della guanina, utilizzato per trattare la leucemia acuta e le malattie infiammatorie intestinali. L'uso eccessivo di 6-tioguanina durante il trattamento clinico può causare effetti collaterali. Inoltre, fornire una dose troppo bassa sarà inefficace. Pertanto, esiste la necessità fondamentale di un approccio rapido, selettivo e di routine per quantificare la 6-tioguanina nei fluidi corporei per supportare un'applicazione clinica. È stato sviluppato un metodo HPLC completamente convalidato per determinare la 6-tioguanina in campioni di sangue intero utilizzando il 5-bromouracile come standard interno. I nucleotidi 6-tioguanina sono stati rilasciati dagli eritrociti dall'acido perclorico e quindi idrolizzati a 100 ° C nella tiopurina madre, 6-tioguanina. Sono stati determinati i seguenti parametri di validazione del metodo: specificità/selettività, intervallo di linearità (479–17.118 ng/mL, R > 0,992), limiti di rilevamento (150 ng/mL) e quantificazione (479 ng/mL), accuratezza (- 5,6 < Bias < 14,7), ripetibilità (CV 1,30–3,24%), precisione intermedia (CV 4,19–5,78%), recupero dell'estrazione (79,1–103,6%) e carryover. Inoltre, è stata studiata la stabilità del farmaco in campioni di sangue intero in varie condizioni di conservazione. Il metodo suggerito è adatto per determinare la 6-tioguanina in campioni di eritrociti di sangue intero per il monitoraggio dei livelli del farmaco e quindi il dosaggio corretto.

La 6-tioguanina (6-TG) è un analogo purinico della guanina; più precisamente è un derivato solforato della guanina1. Il 6-TG apparteneva alla famiglia delle tiopurine ed è stato introdotto nel 1950 come trattamento per la leucemia. Cinquant'anni dopo, i medici hanno iniziato a usarlo per trattare la malattia infiammatoria intestinale, nei pazienti che non avevano ricevuto azatioprina (AZA) o mercaptopurina (MP) a causa di eventi avversi che limitavano il dosaggio o di una risposta non ottimale2, 3. Tuttavia, le preoccupazioni circa il profilo di epatotossicità sono state sollevate. ostacolato dall'uso diffuso, in particolare dall'iperplasia rigenerativa nodulare (NRH)4. Il 6-TG viene utilizzato anche nel trattamento clinico della sindrome da immunodeficienza acquisita, di malattie autoimmuni come la psoriasi e della chemioterapia per le leucemie acute, in particolare la leucemia mieloide acuta e la leucemia linfoblastica acuta5, 6. Il rischio aggiuntivo associato al 6-TG può essere lo sviluppo di linfomi e tumori della pelle, come dimostrato nel caso delle terapie AZA/MP e anti-TNF7, 8. Pertanto, è importante verificare regolarmente il livello di 6-TG per confermare la corretta dose del farmaco o, in caso di valori anomali risultati, per aggiustare la dose. Le tiopurine, inclusa la 6-TG, hanno un effetto immunosoppressivo incorporando i loro metaboliti farmacologicamente attivi, i nucleotidi 6-tioguanina (6-TGN), negli acidi nucleici9. Di conseguenza, ciò porta all'inibizione della proliferazione dei linfociti, compreso il loro ruolo significativo nell'indurre l'apoptosi10. Sebbene i meccanismi che causano la resistenza delle cellule leucemiche alla 6-tioguanina siano attualmente fraintesi11, è stato suggerito che la riduzione o l'assenza dell'attività dell'ipoxantina-guanina fosforibosil transferasi (HGPT) insieme all'attività alterata della tiopurina S-metiltransferasi (TPMT) stimolano la sensibilità e la resistenza a questa composti12. Inoltre, è stato dimostrato che i difetti nel sistema di riparazione del disadattamento del DNA stimolano la resistenza acquisita a numerosi composti farmaceutici antitumorali, tra cui la 6-tioguanina13. La misurazione dei livelli del metabolita eritrocitario 6-TG aiuta a determinare l'adeguatezza del dosaggio di AZA e può essere utilizzata per ottimizzare la dose della terapia antimetabolita per ottenere una risposta clinica migliore senza indurre leucopenia14. La combinazione di infliximab e tiopurine (come la 6-tioguanina) nei pazienti con malattie infiammatorie intestinali è più efficace della monoterapia. Si consiglia di misurare l'attività del TPMT prima di iniziare il trattamento dei pazienti con farmaci a base di tiopurina come la 6-tioguanina, consentendo l'aggiustamento della dose di tiopurina o l'eliminazione completa del farmaco15. In molte etnie, i polimorfismi TPMT determinano un'attività TPMT ridotta (prevalenza del 10%) o assente (0,3%)16. Gli individui che sono omozigoti o eterozigoti per questi tipi di variazione genetica possono avere livelli aumentati di metaboliti del TGN, aumentando il rischio di tossicità del midollo osseo indotta dal farmaco a causa dell'accumulo del farmaco non metabolizzato17. Livelli di 6-TGN superiori a 230 pmol/8 × 108 RBC sono stati associati a risultati migliori nei pazienti in monoterapia. Un livello di 6-tioguanina pari o superiore a 125 pmol/8 × 108 globuli rossi può essere adeguato per raggiungere livelli terapeutici di infliximab18. Generalmente, livelli di 6-TGN superiori a 235 pmol/8 × 108 RBC sono raccomandati come livello di cut-off terapeutico per i pazienti in terapia con AZA o 6-MP19. Un livello sicuro e terapeutico è compreso tra 500 e 800 pmol/8 × 108 globuli rossi20. Per la terapia con 6-TG in pazienti con IBD, non sono stati ancora descritti livelli terapeutici o tossici precisi di 6-TGN. Tuttavia, l’epatotossicità, in particolare l’iperplasia nodulare rigenerativa (NRH) e la malattia venoocclusiva (VOD), è dose-dipendente e correlata a livelli di 6-TGN superiori a 1000 pmol/8 × 108 RBC21. L'uso eccessivo di 6-TG durante il trattamento clinico può avere effetti collaterali extra tossici6. Inoltre, il sottodosaggio sarà inefficace. Pertanto, un approccio rapido e completamente convalidato per la determinazione quantitativa del 6-TG nei fluidi corporei è fondamentale per facilitare l’uso clinico. Attualmente, i test immunologici e la cromatografia liquida ad alta prestazione (HPLC) sono tecniche diffuse, pratiche e sensibili nel monitoraggio dei farmaci terapeutici22, 23.